A 3-dimenziós egyedi molekula-detektálást (3D-SMD) a HILO módszerrel valósítjuk meg. A HILO módszer (Highly Inclined and Laminated Optical) a TIRF módosítása. A TIRF-höz képest kissé csökkentjük a beesési szöget, így a gerjesztő nyaláb nem szenved teljes visszaverődést, hanem áthatol a mintába. Egy vékony mintaszeletet világít meg ezzel kontrasztos képet szolgáltat mélyebb mintasíkokban. A minta optikai tengely irányú mozgatását egy piezo Z-mozgató végzi, ezzel lehetővé téve a minta 3-dimenziós vizsgálatát..
Mikroszkóp: Olympus IX83
Elérhető lézerek: 488 nm, 639 nm
Objektívek: UMPLFLNW 20x, UAPON OTIRF 100x OIL,
Kamera: Hammamatsu Orca-Flash 4.0
Z mozgató: Physik Instrumente, PI E-709 piezo Z stage